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一种埃坡霉素高产菌株选育方法及菌株
本申请公开了一种埃坡霉素高产菌株的选育方法。本申请还提供一种使用上述方法获得的埃坡霉素高产菌株。本申请提供埃坡霉素高产菌株的选育方法,通过采用Genome shuffling技术,将纤维堆囊菌以诱变获得的菌株作为出发株,然后通过多轮递归原生质体融合的方式,将不同亲本的优良性状高效地整合到融合子中,然后借助高通量筛选的方法获得性状显著改良的突变株。本申请提供的选育方法,简便、高效,耗时短,并能得到埃坡霉素产量显著提高的菌株。
2018.11.05
一种农杆菌介导的以黄曲霉菌丝为受体的遗传转化方法
本发明公开了一种农杆菌介导的以黄曲霉菌丝为受体的遗传转化方法,属于微生物学领域。该方法包括以下步骤:双元载体pAg1‑H3酶切去除潮霉素抗性基因片段,与含有来源于米曲霉的吡啶硫胺抗性基因ptrA的目的片段连接,构建成pAg1‑Pt双元载体;双元载体pAg1‑Pt质粒转化农杆菌,获得农杆菌阳性转化子,制备菌液;制备黄曲霉菌丝均质液;将制备所得菌液与制备所得的菌丝均质液混合后共培养,进行黄曲霉的遗传转化;选择性培养,筛选黄曲霉转化子并鉴定阳性克隆。本发明以黄曲霉菌丝体作为转化受体,不受黄曲霉菌株产孢能力的限制,转化效率高且稳定,对不同遗传背景和营养缺陷型的黄曲霉菌株均适用。
2018.10.25
一种PDMS微控板处理方法及其应用
本发明涉及一种生物实验方法,尤其涉及一种PDMS微控板处理方法及其应用。包括如下步骤:S1:PDMS表面处理:吸取PBST溶液,加于PDMS表面,处理时间为10‑15min;S2:加入细胞:加入细胞悬液,静置处理后用PBS洗涤将多余留在表面的细胞冲走;S3:捕获mRNA:加入细胞裂解液,使细胞裂解,获得mRNA;S4:反转录及PCR扩增;将捕获到的mRNA进行反转录,获得cDNA;并将cDNA进行PCR扩增,得到PCR产物;S5:纯化DNA。本发明处理方法可通过对其表面进行处理,减少表面吸附性,增加PDMS的相容性,从而提高测试精确度,且本方法具有操作简便、效果好、成本低等优点。
2018.10.24
一种病毒核酸提取试剂盒
本发明公开了一种病毒核酸提取试剂盒,包括Tris‑HCl溶液、EDTA溶液、高氯酸钠溶液、漂洗液、裂解液、洗脱液、磁珠和蛋白酶K。本发明的核酸提取试剂盒的试剂配方通过大量实验筛选得到,用于病毒核酸提取可以节省大量时间和试剂成本,适用于临床快速、高通量和自动化的要求,显著提高核酸效率,能够满足同时大批量提取病毒DNA/RNA的需求。
2018.10.17
一种诱导型启动子、其重组载体、转化体以及诱导基因表达的方法及其应用
本发明一种诱导型启动子、其重组载体、转化体以及诱导基因表达的方法及其应用,属于启动子领域。所述诱导型启动子包括5‑羟色胺‑N‑乙酰转移酶基因的启动子,且所述5‑羟色胺‑N‑乙酰转移酶基因的启动子受CGMMV诱导。所述重组载体装载有所述诱导型启动子;所述转化体转化有所述重组载体。本发明还提供利用所述诱导型启动子诱导基因表达的方法及该启动子在西瓜转基因方面的应用。本发明的诱导型启动子受CGMMV强烈诱导,该启动子在西瓜基因工程抗病育种研究中具有重要的应用价值。
2018.10.11
一种外周血基因组DNA快速提取方法
本发明提供了一种外周血基因组DNA快速提取方法,包括如下步骤:1)取100‑150μL血液样品,加入200‑250μL Lysis Buffer和20‑35μL Proteinase K的预混溶液,充分颠倒混匀,60℃放置10min,95℃放置10min,期间颠倒混匀数次;2)室温放置2‑5min后,12000rpm离心2min,取50μL左右上清;3)将90‑92μL磁珠加入至装有上述上清的PCR管中,轻轻吹打混匀6次,室温静置孵育5‑10min,将PCR管置于磁力架上3‑5min。本发明具有如下技术效果:1)本发明在整个DNA的提取过程中只涉及了3种试剂,且试剂使用量和样品需求量均较低,因此成本较低;2)整个提取过程耗时较短,每一个步骤简单明确,对PCR的扩增效果影响较小;3)通过实际项目验证,采用该方法提取的DNA,符合绝大部分PCR反应以及MassARRAY平台的检测。
2018.10.10
测序用DNA文库试剂盒以及测序用DNA文库构建方法
本发明涉及基因测序领域,特别涉及测序用DNA文库试剂盒以及测序用DNA文库构建方法。一种测序用DNA文库构建方法,包括以下步骤:片段化DNA进行末端修复与加A,产物与接头进行连接,纯化后,对DNA片段进行尺寸筛选;扩增富集,产物进行纯化,得到DNA文库。该方法将DNA文库构建的流程进行简化,DNA序列末端修复和3’端加A的步骤在一步中完成,并且产物可直接用于连接反应,中间不必经过纯化,大大缩短了文库构建的过程消耗的实验时间;采用了独特的接头设计,极大节省了接头的合成成本,为文库构建的实验人员提供了很大的便利,降低了试剂的消耗,总体建库成本降低。
2018.10.10
沉积物中DNA的预处理方法
本发明公开了一种沉积物中DNA的预处理方法,具体步骤如下:取5~10kg沉积物,加入4~6倍重量的水,搅拌混匀,沉降15~20min;(2)取上清5~10L,加入100~200g明矾,100~200g焦磷酸钠,搅拌混匀,沉降10~15min;(3)取上清3~6L,加入50~100g Tris,40~80g聚乙烯吡咯烷酮,23~47g NaCl,2~4g Triton X‑100,搅拌混匀,沉降15~20min;(4)取上清1.5~3L,提取DNA。本发明提供的一种大量沉积物中DNA的预处理方法,不仅能获得高纯度DNA,还能够准确反映物种的多样性。
2018.09.30
葡萄浆果内坏死病毒侵染性克隆及其构建方法
本发明公开了一种葡萄浆果内坏死病毒侵染性克隆及其构建方法。该侵染性克隆载体是将分段扩增的葡萄浆果内坏死病毒基因组片段通过无缝克隆方式,连接至含有双35S启动子和核酶HDV‑RZ的pCB301‑2x35S‑HDV
RZ
‑NOS载体而获得。通过冻融法将此载体转入农杆菌EHA105感受态细胞,并通过农杆菌接种西方烟草和葡萄验证其侵染性。本发明构建的GINV侵染性克隆能够在农杆菌EHA105菌株中稳定、高效表达,并能成功侵染西方烟草和葡萄寄主。GINV侵染性克隆的获得,使得GINV的研究易于在DNA水平上操作,为后续开展GINV的生物学特性和致病性研究提供有力的工具。
2018.09.30
一种RNA提取溶液和RNA提取溶液制备方法及RNA试剂提取方法
本发明公开了一种RNA提取溶液和RNA提取溶液制备方法及RNA试剂提取方法,包括包含以下各组分的质量分数或摩尔浓度:相对于溶液的总量30‑50%体积的酚;相对于溶液的总量3‑10%体积的多元醇;相对于溶液的总量0.5‑2M浓度的胍盐;相对于溶液总量0.1‑1%体积的十二烷基肌氨酸钠;相对于溶液的总量0.05‑0.2M浓度的醋酸;相对于溶液的总量0.05‑0.2M的醋酸钠,所述剩余组分为超纯水,本发明中通过醋酸和醋酸钠的比例来实现控制缓冲液的pH值环境,既可以实现DNA和RNA彻底的分离,又可以避免RNA在过酸性条件下发生解体,且还结合了硅胶膜吸附柱的便捷性,简化了RNA提取后续的操作步骤,相比于之前长达一个小时以上,可以缩短至10分钟左右即可完成RNA的提取。
2018.09.30
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